《表2 马铃薯病毒引物：怀玉山高山马铃薯不同脱毒方法效果比较》

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《怀玉山高山马铃薯不同脱毒方法效果比较》

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马铃薯病毒的PCR检测：参考相关文献（吴志明等，2000；白建明等，2009；耿宏伟等，2009；程群等，2010；高芳銮等，2013；张永江等，2013），并参考GenBank中基因序列的保守序列，利用Primer Permier 5.0引物设计软件设计6种植物病毒引物，引物由上海生工合成（表2）。PCR体系总体积为25μL，包括：模板cDNA（3μL）、dNTP（2μL）、10×PCR Buffer（2.5μL）、上游引物（0.5μL）、下游引物（0.5μL）、r Taq酶（0.5μL）和ddH2O（16μL）。各组分依次加入，混匀后，置于PCR仪，反应条件设置为：94℃下预变性时间为4 min；94℃下变性时间为30 s；50℃下退火时间为30 s；72℃下延伸时间为1 min，共进行35个循环；72℃下延伸时间为10 min。PCR产物电泳检测（1%琼脂糖凝胶）并拍照。以上实验重复3次。不同脱毒方法的效果比较采用SPSS软件19.0进行统计学差异分析。