《表1 不同处理对苹果茎尖存活率及脱毒率的影响》

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《苹果茎尖超低温脱毒体系的建立》

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选择‘烟富3号’、‘M9’、‘M9T337’继代5次的组培苗各切取20个2 mm茎尖，接种在预培养基上预培养2 d，品种间视为3次重复（即60个样本，下同）。预培养基设置0.25 mol/L、0.5 mol/L、0.75 mol/L和1.0 mol/L系列蔗糖浓度梯度。培养后依次进行60 min装载、60 min PVS2处理。然后转入10 m L冻存管，直接投入液氮中冷冻1 h。将处理后的茎尖接种在增殖培养基上暗培养1周，之后转为光照培养，一个月后统计茎尖存活率，并进行继代增殖扩繁，待茎尖长大后，对成活株系进行RT-PCR病毒检测。超低温处理后的存活率随蔗糖浓度的增加先升高后降低（图6）:当蔗糖浓度从0.25 mol/L上升到0.5 mol/L时，存活率从18.33%上升到28.33%，并达到最高，继续升高至0.75 mol/L和1.0 mol/L时，存活率反而大幅度降低至11.67%和6.67%。这可能是由于蔗糖浓度对细胞渗透压造成的影响，从而影响了存活率。由数据统计可知（表1），四种预培养蔗糖浓度下茎尖脱毒率数值差别较大是各蔗糖浓度所对应的脱毒植株个数和存活个数相差较小的缘故，四种情况下脱毒效果相近。而0.5 mol/L蔗糖浓度下茎尖存活数为15，显著高于其他情况。可知，0.5 mol/L预培养蔗糖浓度在实验中最为适宜。