《表1 引物序列：红花注射液对野百合碱损伤血管内皮细胞NO活性、内皮型NO合成酶及结缔组织生长因子表达的影响》

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《红花注射液对野百合碱损伤血管内皮细胞NO活性、内皮型NO合成酶及结缔组织生长因子表达的影响》

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搜索Primer Bank，筛选HUVECs细胞适用的CTGF和e NOS荧光定量PCR引物（表1）。引物由上海Invitrogen公司合成。用酚/氯仿法提取以100μg/ml红花注射液和（或）MCT处理的各细胞总RNA；以1μg的RNA为模版，用PrimeScript TM RT reagent Kit with g DNA Eraser试剂盒合成c DNA（37℃15min；85℃5s）；按照TB GreenTMPremix Ex TaqTMⅡ（Tli RNase H Plus）试剂盒说明，以合成的c DNA为模板用480Ⅱ荧光定量PCR仪进行荧光定量PCR。反应条件为:变性95℃30s，1个循环，PCR反应（95℃5s，60℃30s，40个循环），熔解（95℃5s，60℃1 min，95℃，1个循环），降温（40℃30s，1个循环）；实验中以β-actin作为对照。反应完成后比对扩增曲线和熔解曲线，用2-ΔΔCt法计算RQ值。