《表2 样本Barcode序列》

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《黑里河和贺兰山自然保护区华北落叶松根区土壤中外生菌根真菌群落》

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1.3.2 PCR扩增的条件与程序:以稀释后的基因组DNA为模板，使用带barcode且针对真菌ITS1的标准特异引物ITS5‐1737F（5’‐GGAAGTAAAAGT CGTAACAAGG‐3’）与ITS1‐2043R（5’‐GCTGCGTTCT TCATCGATGC‐3’）（Lu et al.2013） 进行扩增，使用高效和高保真酶（New England Biolabs公司的Phusion?High‐Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer）在Bio‐rad T100梯度PCR仪上进行PCR，确保扩增效率和准确性。本实验设计的barcode序列见表2。采用的30μL PCR反应体系包含20mmol/L的Phusion Master Mix 15μL，2μmol/L的Primer 3μL，1ng/μL的gDNA 10μL，H2O 2μL，扩增程序为:98℃预变性1min；30个循环包括98℃变性10s，50℃退火30s，72℃延伸30s；最后72℃延伸5min。