《表1 乙型肝炎病毒基因S区域的RT-LAMP引物序列》

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《应用逆转录-环介导等温扩增技术检测乙型肝炎病毒RNA方法的建立》

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注:R代表碱基A、G

设计2对引物，分别是2条外引物F3和B3，2条内引物FIP和BIP。引物位置见图1，以我国4种主要HBV基因型（A、B、C、D型）保守序列S区段设计通用引物，下载NCBI公布的HBV基因型（A、B、C、D型）约120条，用序列对比软件Clustal Omega序列对比，剔除易突变基因型，选出S区段突变少，具有代表大多数的基因型A型（Genebank号:KP234051）、B型（JF899335.1）、C型（KJ598689.1）、D型（KC774433.1），选取最保守区段作为靶基因。用引物设计软件Primer Explorer V5设计RT-LAMP通用引物。以突变区域兼顾B、C基因型为主，互补引物F1c、B1c的5'端和其余引物的3'端至少10个碱基不突变，突变摆动序列以通用字母代替为原则筛选引物，应用BLAST对引物进行再次筛选确定最佳引物。引物序列见表1。