《表3 不同浓度中性红染色30min对11种海洋微藻的染色效率 (%) Table 3 The staining efficiency of neutral red in 11strains of m

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《适合海洋微藻活体染色的方法评价》

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中性红在光镜下很容易计数着色微藻细胞，但非荧光染色剂浓度对藻细胞染色存在较大影响，通常浓度太低会造成染色效果不好，而高浓度可能影响微藻细胞活性。研究结果表明，低浓度中性红的毒性对细胞活性影响不大[15，20]。为了解中性红浓度对染色效果的影响，将1%中性红储存液稀释为1/2 000，1/10 000和1/50 000三个浓度对处于指数生长期的海洋微藻进行染色实验。实验结果表明，中性红对不同门类、个体大小和pH值（7.28~8.89）范围的海洋微藻均具有很好的染色效果（图1），死亡的海洋微藻未被中性红染色（图2）。多重比较和染色效率结果（表2和表3）表明，染色最适浓度为1/10 000，最佳染色时间为30 min，1/2 000和1/10 000两种浓度之间无显著差异，染色时间30和60 min之间无显著差异。这与Ehara等[13]在中性红吸光值0.2（A455）条件下对绿藻（Micrasterias pinnatifida）进行活体染色研究的最佳染色时间（30min）一致。但与有些研究结果有所差异，例如，Zetsche等[3]和Luz等[21]的研究结果也表明，对于所检测的7种海洋硅藻、3种海洋甲藻和2种淡水绿藻来说，中性红的染色效果最好，其染色浓度为1/50 000，比本实验最适浓度（1/10 000）低，但是染色时间（2h）更长。王珂等[15]进行了中性红检测淡水蓝藻铜绿微囊藻（Microcystis aeruginosa）活性的研究，结果表明，染色最佳浓度为1/5 000，最佳染色时间为15min，染色率达到98%以上。这种差异可能是由于微藻的种类、盐度或生长时期等不同引起的。