《表3 接合用菌株信息：IncI1和IncN质粒阳性沙门氏菌耐药及质粒接合转移特征》

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《IncI1和IncN质粒阳性沙门氏菌耐药及质粒接合转移特征》

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基于IncI1和IncN质粒阳性菌株及受体菌药敏性结果，选择分别携带IncI1质粒和IncN质粒的沙门氏菌作为供体菌，不含该2种质粒的大肠杆菌和沙门氏菌为受体菌，采用膜过滤法进行接合，接合用菌株相关信息如表3所示。接合方法如下：取OD600 nm为0.6的供体菌和受体菌菌液各1 mL于5 mL LB肉汤中混匀，转入孔径0.22μm的滤器过滤，过滤后将滤膜紧贴于不含抗生素的LB琼脂培养基表面，有菌的一面向上，37℃过夜培养。用5 mL LB肉汤清洗过夜培养的滤膜，梯度稀释后分别涂布于同时含有CRO(32μg/mL）和CIP(16μg/mL）或同时含有STR(64μg/mL）和CIP(16μg/mL）的LB平板上，双抗平板的选择根据供体菌和受体菌的耐药表型确定，每个梯度3个平行，37℃培养48 h，计数。将OD600 nm为0.6的受体菌梯度稀释后均匀涂布于不含抗生素的LB平板，每个梯度3个平行，37℃培养过夜，计数，用于菌液起始浓度的确定。同时，将供体菌和受体菌分别涂布于相应的双抗平板上，每株菌3个平行，37℃培养48 h，作为对照。培养结束后，确定供体菌和受体菌不能在相应的双抗平板上生长时，再在涂布有不同稀释度接合子的双抗平板上随机挑选10个单菌落，以表2中的引物进行PCR扩增，扩增产物采用1%的琼脂糖凝胶进行电泳和测序分析，确定IncI1和IncN质粒在接合过程发生了水平转移。接合子携带的耐药基因和药敏性检测方法同1.3.1节和1.3.2节。接合频率计算公式如下：