《表1 HPV16 E2、HPV16 E6和HPV16 E7的DNA所用引物序列》

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《宫颈癌患者高危型人乳头瘤病毒DNA的测定及意义》

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2.研究方法:（1）模板制备。采集两组研究对象的宫颈新鲜组织，对能够立即送检的组织，采集后立即用无菌双蒸水进行洗涤，不能立即送检的组织则放置于-20℃的冰箱中低温保存。用手术刀将洗涤后的组织切至细碎，置于无菌离心管中，注入1 ml无菌双蒸水进行洗涤，转速设置为12 000 r/min，离心10 min，留取沉淀物。在沉淀物中加入DNA提取液，将混合物置于-20℃的冰箱中低温保存。检测前取出混合物，置于高速冷冻离心机进行离心备用，转速设置为12 000 r/min，温度4℃，离心10 min。（2） HPV16/18检测。应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）和膜杂交法进行HPV16/18的检测，由专业的医护人员严格按照试剂盒的操作说明进行操作。试剂盒选用医用核酸分子快速杂交法试剂盒（广东凯普生物科技股份有限公司生产），提取DNA后进行PCR的扩增杂交以及洗膜、显色，观察结果是否呈现阳性，与宫颈癌阳性标本进行对照，并以磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）作为阴性对照，保证检测结果的准确性。（3） DNA序列检测。分别采用酚-氯仿和异硫氰酸胍-酚氯仿提取法来提取观察组组织标本和对照组宫颈脱落细胞标本中的DNA，对HPVL区的基因序列片段使用引物（所用引物序列见表1），通过热启动聚合酶链反应检测HPV16E2、E6和E7的DNA。