《表1 低温处理花药形成愈伤组织及单倍体出苗数量》

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《烟草单倍体基因编辑系统的建立》

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每个实验组及对照组各100粒花药，大量的花药在培养过程中褐化，少量花药膨胀形成愈伤组织。45 d培养后，形成愈伤组织率及获得单倍体植株数量如表1所示。其中，在低温处理4～6 d后，花药形成愈伤组织率较新鲜花药培养有显著提高，并且从每粒花药所形成的愈伤组织中发出的单倍体幼苗数量也较多。大部分愈伤只能发出1～5个幼芽，但少部分可丛生幼芽，能分离出20～40株幼苗，这种现象在4℃处理4～6 d的实验组中发生较多。图2 A-C所示为花药到单倍体幼苗的培育过程；图2 C-D为单倍体和四倍体的幼苗和叶片对比，单倍体的叶片较四倍体的叶片狭长。