《表1 影响因素排序表:芒果胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgFAE基因对孢子产量及菌丝生长的影响》

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《芒果胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgFAE基因对孢子产量及菌丝生长的影响》


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依据同源重组原理构建Cg FAE基因敲除突变体(图2)。以芒果胶孢炭疽菌(C.gloeosporioide)野生型基因组DNA序列为模板,用含有酶切位点的上下游同源臂引物Cg FAE-up F/R和Cg FAE-down F/R分别进行PCR扩增,扩增产物经电泳检测显示上游同源臂片段为751 bp,下游同源臂片段为764 bp,与预测片段大小相同(图3)。将Cg FAE基因的敲除载体p CB1532-Cg FAE线性化后转入芒果C.gloeosporioide野生型原生质体中,用抗生素氯嘧磺隆进行筛选后得到53个转化子,提取各转化子的基因组DNA,利用3对引物Cg FAE-F/R、Cg FAE-jc5F/R、Cg FAE-jc3F/R(表1)进行PCR验证,结果显示第7号转化子利用Cg FAE-F/R引物不能扩增目的条带,而通过引物Cg F-AE-jc5F/R、Cg FAE-jc3F/R能够分别扩增出目的条带1 184 bp、1 103 bp (图4),经鉴定后第7号转化子为阳性转化子,将其命名为ΔCgfae-7。