《表1 用于LAMP检测的各种染料》

《表1 用于LAMP检测的各种染料》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《环介导等温扩增技术及其在基因突变筛查中的应用研究》


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LAMP结果判定多样,根据检测目的不同,终点监测方法亦不同。目前应用比较广泛几种常见判读方法有:(1)浊度检测:阳性在扩增过程中产生大量的副产物-焦磷酸镁(dNTPs和MgSO4反应的副产物)白色沉淀,裸眼可判断有无扩增产物[25];(2)荧光检测:在反应液中加入SYBR GreenΙ、SYTO9、溴化乙锭、钙黄绿素等荧光染料[26-27],裸眼或紫外灯下即可观察扩增产物是否有相应颜色变化,具体特点列于表1;(3)琼脂糖凝胶电泳检测:由于扩增产物是一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜结构组成的DNA混合物[28]。因此,LAMP的扩增产物呈典型的梯状条带明显区别于普通PCR产物,易于辨认;(4)pH感应:由于离子释放,LAMP反应期间溶液的pH会发生变化(扩增过程中由碱性变为酸性)。因此一个简单的pH计可用于LAMP扩增过程的实时监控[10,27];(5)运用实时浊度仪:LAMP反应过程中产生的焦磷酸镁沉淀在400nm处有吸收峰。因此,日本荣研化学株式会社利用此原理,研制出专门针对LAMP检测的实时终点浊度仪LA-320C。其每隔6秒一次对样本的浊度进行实时测定以确认扩增的程度,所得结果可直接在电脑中通过图表显示[14,26,29]。