《表2 IL-2、IL-4、IFN-γ和β-actin基因的引物设计》

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《中草药制剂对鸡免疫器官发育及脾脏中免疫因子表达的动态影响》

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采用荧光定量RT-PCR法测定IL-2、IL-4和IFN-γmRNA的表达量，用Trizol试剂抽提总RNA，使用PrimeScriptTMRT Master Mix（Perfect Real Time）（TaKaRa公司）反转录试剂盒得到IL-2、IL-4、IFN-γ的cDNA。根据GenBank中发表的鸡全基因序列，应用Prime 5.0软件设计特异的上、下游引物，使用GenBank Blast同源性检索后由Invitrogen公司（上海）合成。IL-2、IL-4、IFN-γ和β-actin的引物序列及参数见表2。以β-actin为内参，将反转录得到的cDNA产物作为模板，采用优化后的条件建立反应体系，按照TB GreenTM Premix DimerEraserTM（Perfect Real Time）(TaKaRa公司）试剂盒说明书对各样品中IL-2、IL-4、IFN-γ进行实时定量检测，每个样品设计3个重复。