《表1 供试玉米小斑病菌株信息》

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《河北省玉米小斑病菌优势生理小种鉴定及ITS序列分析》

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提取不同地区43个玉米小斑病菌的基因组DNA，菌株信息见表1。利用ITS特异性引物（F:5’-TGCAAAATATGTGCTGCGCT-3’；R:5’-CCCAT-GTCTTTTGCGCACTT-3’）扩增目的基因。PCR反应体系为50μL，模板DNA 2μL，上下游引物各2μL，PCR Master Mix 25μL以及无菌水19μL。扩增反应条件：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸45 s，35个循环；最后72℃延伸10 min。PCR产物送上海生物工程技术有限公司进行测序。将测序结果在NCBI网站上进行BLAST同源性比较，利用MEGA5.0（molecular evolutionary genetics analysis）软件构建UPGMA树（unweighted pair-group method with arithmetic means）分析进化关系。