《表3 转基因玉米Bt11品系稳定性分析》

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《基于双重微滴数字PCR对转基因玉米Bt11品系定量检测》

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RSD：相对标准偏差；下同

以10 ng/μL的转基因玉米Bt11标准物质基因组DNA为模板进行ddPCR，测定转基因玉米Bt11品系稳定性。ddPCR扩增反应的热点图（图1）显示，ddPCR所获得的阴性微滴和阳性微滴之间有明显的荧光信号差距，拖尾现象不严重，通过设置统一的阈值线可进行阴性和阳性反应点的区分。各微滴实验结果的数据分析（表3）显示，3次重复扩增实验微滴数都大于14 000，满足泊松分布统计（有效微滴数>10000）的要求，说明实验数据具有统计学意义。内参基因Zein的3次重复实验基因拷贝数分别为161、160和166，平均拷贝数为162.33，RSD为1.98%；Bt11品系特异性基因的3次扩增反应所得的拷贝数分别为86.20、81.30和83.90，平均拷贝数为83.80，RSD为2.93%。上述结果表明，本方法中所用内源和外源基因引物和探针的扩增稳定性良好，可同时进行转基因玉米Bt11品系特异性序列及内源基因的ddPCR检测。