《表6 单因素水平设计：大肠埃希氏菌O157∶H7/NM标准物质制备》

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《大肠埃希氏菌O157∶H7/NM标准物质制备》

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注：结果均为质量分数。

(3）保护剂添加水平及配方设计。对T，S和M先进行单因素添加水平的试验。添加水平详见表6，用无菌水配制T、S、M的单剂保护剂体积100 mL，115℃下高压灭菌30 min，冷却后分别添加细菌稀释液1 mL（统称混合液A），使混合液A的含菌数为103CFU/mL。置于摇床振荡器上匀速振摇10 min后，上下颠倒充分混合，吸取1 mL于无菌平皿进行菌落计数，作6个平行，每次吸取前需重新上下颠倒，取平均值作为混合液A的菌浓度。按3 mL分装于5 mL西林瓶中，-70℃下预冻20 h后冷冻干燥，按照2.3.4冷冻干燥参数表4进行冻干。于冻干后第0 d检测冻干样品的菌浓度，取12个平行样本，每个样本用3 mL无菌BHI复水（室温下静置5 min），吹吸混匀后立即检测，取1 mL于平皿，平行2个，另取1 mL于9 mL PBS中进行10倍数稀释，对每个稀释度进行平行2次计数取平均值。按照式（1）和式（2）计算3种单剂在冻干后的存活率（取平行6个的计数结果均值）。