《丛枝菌根共生体形成机制研究》求取 ⇩

1绪论1

1.1丛枝菌根概述1

1.1.1 AM真菌的生活史1

1.1.2 AM真菌的非共生生长2

1.2AM真菌与植物共生的过程和稳定性机制3

1.2.1 AM真菌与植物共生的过程3

1.2.2 AM真菌与植物共生的稳定性机制8

1.3AM真菌与宿主共生过程中附着胞的形成和防御反应的产生9

1.3.1 附着胞的形成9

1.3.2 防御反应的产生10

1.4AM共生体中植物防御反应的调节机制13

1.4.1 外源诱导子的降解14

1.4.2 防御信号分子的钝化15

1.4.3 碳水化合物和激素的调节16

1.4.4 磷和黄酮／异黄酮类物质的调节18

1.5 菌根共生相关蛋白18

1.6 菌根共生相关基因20

参考文献22

2AM真菌和根瘤菌侵染紫穗槐的时空变化31

2.1材料和方法31

2.1.1 紫穗槐苗木培养31

2.1.2 AM真菌和根瘤菌侵染紫穗槐的测定32

2.1.3 透射电镜观察AM真菌和根瘤菌侵染紫穗槐33

2.2结果与分析33

2.2.1 AM真菌和根瘤菌侵染紫穗槐的动态变化33

2.2.2 透射电镜观察AM真菌和根瘤菌侵染紫穗槐的动态变化36

2.3 讨论39

2.4 本章小结40

参考文献40

3AM真菌对紫穗槐防御反应的调控及共生相关蛋白的SDS-PAGE分析41

3.1材料和方法41

3.1.1 实验材料41

3.1.2 实验方法41

3.2结果与分析47

3.2.1 AM真菌对紫穗槐植株生长的影响47

3.2.2 AM真菌调控紫穗槐防御反应的研究50

3.2.3 黄酮／异黄酮类物质的分离提取、鉴定和含量测定54

3.2.4 菌根共生相关蛋白SDS-PAGE分析59

3.3讨论64

3.3.1 AM真菌调控植物防御反应的机制64

3.3.2 AM共生体建立的调节信号分子——黄酮／异黄酮类物质65

3.3.3 菌根共生相关蛋白的研究现状66

3.3.4 菌根共生相关蛋白的产生与AM共生体中防御反应调控的关系67

3.4 本章小结67

参考文献68

4基于iTRAQ技术对紫穗槐菌根共生蛋白分析70

4.1材料和方法70

4.1.1 实验材料70

4.1.2 实验方法70

4.2结果与分析74

4.2.1 用于iTRAQ分析的实验样品74

4.2.2 蛋白质定量75

4.2.3 SDS-PAGE初步检测75

4.2.4 菌根蛋白的鉴定及分析76

4.2.5 菌根差异表达蛋白的鉴定78

4.2.6 菌根差异表达蛋白的功能分类83

4.3讨论84

4.3.1 信号转导相关蛋白84

4.3.2 胁迫和防御相关蛋白85

4.3.3 蛋白质折叠和降解相关蛋白86

4.3.4 能量相关蛋白87

4.3.5 细胞结构相关蛋白88

4.3.6 膜和运输相关蛋白88

4.3.7 代谢相关蛋白88

4.3.8 蛋白质合成相关蛋白89

4.3.9 转录相关蛋白89

4.3.10 未知蛋白89

4.4 本章小结89

参考文献91

5基于抑制消减杂交技术筛选AM真菌与紫穗槐共生相关基因93

5.1材料和方法93

5.1.1 实验材料93

5.1.2 实验方法93

5.2结果与分析104

5.2.1 紫穗槐培养和侵染情况检测104

5.2.2 总RNA完整性和纯度检测107

5.2.3 紫穗槐AM相关基因的SSH107

5.2.4 紫穗槐SSH cDNA文库的构建和插入片段的PCR鉴定108

5.2.5 差异基因的反向Northern Blot杂交验证109

5.2.6 序列测定和基因功能注释110

5.2.7 已知共生相关基因的功能分类112

5.2.8 未知基因序列编码肽段的预测分析113

5.3讨论115

5.3.1 测试样品RNA提取115

5.3.2 SSH技术115

5.3.3 AM真菌与紫穗槐共生相关基因的研究116

5.4 本章小结122

参考文献122

6基于转录组测序技术分析紫穗槐菌根差异表达基因125

6.1材料和方法125

6.1.1 实验材料125

6.1.2 实验方法125

6.2结果与分析130

6.2.1 紫穗槐根部RNA质检结果130

6.2.2 转录本组装及数据统计131

6.2.3 原始数据质控134

6.2.4 组装后功能注释结果139

6.2.5 差异表达基因分析143

6.2.6 qRT-PCR结果分析148

6.3讨论157

6.3.1 转录组测序技术157

6.3.2 紫穗槐与AM真菌共生相关基因158

6.3.3 qRT-PCR检验结果164

6.4 本章小结164

参考文献165

附录169