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实验须知1

目 录1

第一部分培养基的配制与灭菌3

实验一培养基的配制与灭菌3

一、实验目的3

二、实验材料及仪器3

三、实验内容3

1．培养基的配制3

2．玻璃器皿的洗刷和包装7

3．灭菌法8

四、报告要求8

保藏9

一、实验目的9

第二部分微生物的纯种分离与保藏9

实验二微生物的纯种分离与9

五、思考题9

二、实验材料及仪器10

三、实验内容10

1．土壤微生物的分离10

2．用划线分离法进行细菌的12

纯化12

3．微生物菌种的冰箱保藏法13

4．根据菌落及培养特征鉴别13

微生物的类型13

5．微生物的平板计数法15

实验三病毒、细菌、放线菌形16

第三部分微生物形态的观察16

态的观察16

五、思考题16

四、报告要求16

一、实验目的17

二、实验材料及仪器17

三、实验内容17

1．病毒17

（1）病毒的鸡胚培养及病斑17

观察17

（2）病毒形态的观察18

2．细菌18

（1）利用暗视野映光法观察18

生活的变形杆菌的运动18

（2）细菌细胞大小的测量19

四、报告要求21

（2）孢子形态的观察21

（1）孢子丝形态的观察21

3．放线菌21

（3）细菌的形态和构造21

五、思考题22

实验四细菌染色技术22

一、实验目的22

二、实验材料及仪器22

三、实验内容22

1．细菌的简单染色法22

2．革兰氏染色法（Hucker改23

良法）23

3．芽孢染色法（Conkin）改进25

Wirtz的方法）25

4．荚膜染色法（墨汁背景染色25

法）25

5．鞭毛染色法（按申云生氏法26

略加改进）26

五、思考题27

四、报告要求27

实验五酵母菌和霉菌形态的·28

观察28

一、实验目的28

二、实验材料及仪器28

三、实验内容29

1．酵母菌的形态29

2．霉菌的形态29

四、报告要求29

五、思考题30

第四部分细菌的生理生化反应30

实验六细菌的生理生化反应30

一、实验目的30

1．含碳化合物的分解和利用31

（1）油脂水解试验31

三、实验内容31

二、实验材料31

（2）淀粉水解试验32

（3）糖类（醇或糖苷）发酵试33

验33

（4）乙酰甲基甲醇试验（V.P．33

试验）33

（5）甲基红试验（M.R．试34

验）34

2．含氮化合物的分解和利用35

（1）明胶液化试验35

（2）硝酸盐还原试验35

（3）产氨试验37

（4）硫化氢产生的试验37

（5）吲？产生试验38

（6）石蕊牛乳试验39

四、报告要求41

五、思考题42

第五部分 环境条件对微生物生命活动的影响42

实验七大肠杆菌生长曲线的42

测定42

一、实验目的43

二、实验材料和仪器43

三、实验内容43

1．实验处理43

2．实验步骤43

（1）接种43

（2）培养43

（3）比浊44

四、报告要求44

五、思考题44

二、实验材料及仪器45

一、实验目的45

实验八环境因素对微生物生45

长发育的影响45

三、实验内容46

1．物理因素的影响46

（1）紫外线对金黄色葡萄球46

菌生长的影响46

（2）氧对醋酪酸梭状芽孢杆46

菌的影响46

2．化学因素的影响47

（1）pH值对金黄色葡萄球47

菌生长的影响47

（2）化学药剂对金黄色葡萄48

球菌生长的影响48

（2）痢疾杆菌714噬菌体对49

菌的影响49

痢疾杆菌的裂解作用49

3．生物因素的影响49

黄色葡萄球菌和枯草杆49

（1）青霉菌对大肠杆菌、金49

（3）抗原抗体的凝集反应50

四、报告要求51

五、思考题52

实验九酵母菌的酒精发酵以52

及影响发酵的条件52

一、实验目的52

二、实验材料及仪器53

三、实验内容53

1．培养基的配制及仪器的准53

备53

2．接种及发酵54

3．结果观察54

（1）酵母菌细胞的计数55

（2）酒精蒸馏及酒精度的测56

定56

（3）甘油的定性分析法57

四、报告要求58

五、思考题59

附录一显微镜油镜的使用方60

法60

一、显微镜的全部结构60

二、显微镜的使用方法60

1．显微镜的放置60

2．调节光照60

3．低倍镜观察61

4．高倍镜观察61

5．油镜观察61

一、洗涤液配制法62

6．镜检完毕后的工作62

附录二玻璃器皿的清洁62

二、各种玻璃器皿的洗涤63

附录三灭菌技术64

一、机械灭菌法64

1．硅藻土过滤器（又称Berke-64

feld或Mandler滤器）64

2．蔡氏石棉板滤器（又称赛氏64

滤器，即Seitz滤器）64

3．玻璃滤器65

二、化学灭菌法66

三、物理灭菌法66

1．干热灭菌67

2．间歇灭菌68

3．高压蒸汽灭菌69

4．紫外线72

附录四微生物的接种技术72

一、斜面接种技术73

二、液体接种75

三、由液体培养基接种液体75

培养基75

四、穿刺接种75

五、病毒的鸡胚接种75

附录五实验用菌种一览表77

一、细菌及放线菌77

二、酵母菌78

三、霉菌79

四、其他79

三、淀粉培养基（试验淀粉80

基（葡萄糖蛋白胨培养基）80

水解用）80

一、糖发酵液体培养基80

附录六实验用培养基配制法80

二、M.R.-V.P．试验培养80

四、油脂培养基81

五、硝酸盐还原试验培养基81

六、产氨试验培养基（蛋白82

胨牛肉膏液体培养基）82

七、产生硫化氢试验的培养82

基82

八、石蕊牛乳培养基82

培养基83

试剂）83

一、甲基红试剂（M.R．试验83

制法83

附录七实验用记剂、溶液配83

十四、玉米深层培养基83

十一、肉膏蛋白胨琼脂培养83

十三、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）83

放线菌用）83

十二、淀粉琼脂培养基（培养83

基83

十、肉膏蛋白胨液体培养基83

九、明胶培养基83

六、吲？试剂（Ehrlich试剂）84

五、氨试剂（奈氏试剂）84

菌形态用）84

七、乳酸石炭酸溶液（观察霉84

四、亚硝酸盐试剂84

三、淀粉水解试验用碘液84

（V.P．试剂）84

二、乙酰甲基甲醇试验试剂84

八、1％来苏尔溶液85

九、5％石炭酸溶液85

十、0.1％HgCl2溶液85

十一、1％硫酸铜溶液85

十二、正丁醇-醋酸-水溶液85

（4:1:5）85

十三、硝酸银丙酮溶液85

十四、碱性酒精溶液（1％氢85

氧化钠酒精溶液）85

十五、7.5N氢氧化铵溶液85

二、革兰氏染色染液86

一、普通染色法常用染液86

附录八实验用染液配制法86

三、芽孢染色染液87

四、齐氏（Ziehl）石炭酸复红87

染液87

五、鞭毛染色染液87

附录九伯杰（Bergey）氏真细88

菌目检索表（第七版）88

一、真细菌目分科检索表88

二、肠杆菌科检索表89

三、小球菌科检索表90

四、芽孢杆菌科检索表91

五、埃希氏杆菌族检索表91

六、埃希氏杆菌属分种检索表91

附录十微生物学教学进度表92

主要参考书目93