《神经解剖学传导通路追踪法》求取 ⇩

第一章 实验神经解剖学——一般方法与实验室程序1

一、引言1

二、传导束追踪法1

（一）方法的类型1

（二）方法的选定3

三、实际问题4

（一）实验动物4

（二）组织处理9

四、分析12

（一）材料的总量12

（二）分析的方法12

（三）正常材料12

（四）制图与重建13

五、神经解剖学实验室14

（一）动物室与外科手术14

（二）光学设备14

（三）实验室的预防措施15

六、附录15

（一）制备冷冻切片的组织包埋15

（二）用滑动切片机作冷冻切片16

（三）染色法17

第二章 选择性破坏中枢神经系统特定部位的方法24

一、引言24

二、立体定向技术24

（一）理论基础24

（二）立体定向图的绘制25

（三）坐标的确定26

三、非选择性损伤技术26

（一）机械损伤26

（二）注射非选择性毒素27

（三）大脑血管系的改变27

（四）放射性物质27

（五）超声波28

（六）温度损伤28

（七）电解损伤28

四、对电解损伤的评价29

五、选择性损伤技术32

（一）海人酸及谷氨酸衍生物32

（二）神经毒素儿茶酚胺和吲哚胺衍生物35

六、附录：立体定向图谱介绍39

第三章 输送示踪物的方法40

一、引言40

二、加压注射法40

（一）微量注射器注射法41

（二）微管注射41

三、离子透入注射法（或微电泳）43

（一）一般注意事项43

（二）细胞外注射44

（三）细胞内注射45

四、附录48

（一）微电极技术的一般介绍48

（二）微电极的制作与应用49

（三）慢性微电极技术及其应用51

第四章 溃变轴浆的银浸染法55

一、引言55

二、理论性探讨57

（一）银浸染法的应用57

（二）银浸染法的选择58

三、实验应用的一些问题58

（一）术后存活期58

（二）固定与切片59

四、当前几种银浸染法的一般特性60

（一）Glees法60

（二）Nauta-Laidlaw法61

（三）Fink-Heimer法63

（四）铜-银法65

（五）Nauta-Laidlaw,Fink-Heimer及铜-银法的比较69

（六）其它银浸染法70

五、关于溃变纤维与终末溃变的说明71

（一）轴索溃变71

（二）终末溃变73

六、其它溃变神经元现象73

（一）细胞体与树突的溃变相73

（二）间接的Waller溃变75

（三）丘脑内的逆行性尘粒75

七、镜检时判断错误的原因75

（一）神经元的银沉积76

（二）自发性、偶然性及感染性溃变78

（三）Cammermeyer暗神经元78

（四）神经胶质成分与结缔组织78

（五）嗅球内的人工产物79

八、优点与缺点79

（一）优点79

（二）缺点80

九、附录80

（一）Nauta-Laidlaw法80

（二）Fink-Heimer法81

（三）Ebbesson-Robinson法83

（四）铜-银法83

第五章 中枢神经系统内轴索联系的放射自显影示踪术86

一、引言86

二、方法的原理86

三、方法学87

（一）放射性示踪物的选择87

（二）示踪物的脑内注射91

（三）动物的存活期92

（四）灌注和固定94

（五）切片及装片94

（六）切片涂布乳胶96

（七）乳胶的曝光97

（八）乳胶的显影和定影98

（九）组织染色98

四、资料分析99

（一）标记通路的确定99

（二）常见的人工产物100

五、电镜放射自显影技术102

六、优点和缺点104

（一）优点104

（二）缺点105

七、附录105

（一）猫脑的石蜡包埋程序105

（二）暗室105

（三）石蜡切片的焦油紫染色105

（四）D-19b显影液106

（五）F-5定影液106

第六章 辣根过氧化物酶（HRP）——基本方法107

一、引言107

二、基本用法107

三、HRP的结合与输送108

（一）HRP的特性108

（二）HRP的扩散108

（三）HRP与神经元的结合111

四、方法学113

（一）麻醉剂的选择113

（二）细胞外给药法113

（三）存活时间115

（四）固定和切片116

（五）HRP的摄取和输送的增强117

五、各种HRP法的一般特点118

（一）DAB法118

（二）o-D法120

（三）BDHC法123

（四）TMB法123

六、结果和解释124

（一）注射的部位124

（二）细胞体的标记125

（三）轴索和终末标记128

（四）错误的原因130

七、优点和缺点131

（一）优点131

（二）缺点131

八、附录132

（一）二氨基联苯胺（DAB）法（LaVail）132

（二）联苯胺二盐酸（BDHC）法I（J.S.de Olmos）133

（三）联苯胺二盐酸（BDHC）法II（M-M Mesulam）135

（四）四甲基联苯胺（TMB）法I（J.S.de Olmos）137

（五）四甲基联苯胺（TMB）法II（M-M Mesulam）139

第七章 辣根过氧化物酶——神经元的细胞内染色143

一、引言143

二、方法144

（一）准备步骤144

（二）记录与注射144

（三）动物灌注146

（四）组织学处理146

（五）资料分析147

三、技术的应用148

四、优点和缺点149

（一）优点149

（二）缺点150

五、附录150

（一）试剂配制150

（二）用于逆行Golgi样标记神经元群的另一法151

第八章 辣根过氧化物酶和荧光物质与其它方法结合的应用153

一、引言153

二、侧支投射的追踪153

（一）HRP逆行双标记的各种结合法154

（二）荧光素的双标记法160

（三）HRP的侧支输送161

三、HRP和顺行追踪法161

四、HRP和递质类的组织化学法162

五、HRP和2-脱氧葡糖（2-DG）法162

六、附录163

（一）HRP与（3H）-BSA逆行双标记法（Oswald Steward）163

（二）HRP与（3H）-apo-HRP逆行双标记法（Aldo Rustioni）165

（三）荧光物质逆行双标记法（H.G.J.M.Kuypers）166

（四）HRP和AChE同时显示法168

（五）2-DG和HRP组织化学法（Oswald Steward）169

第九章Golgi法171

一、引言171

二、快速Golgi法171

（一）准备步骤172

（二）固定172

（三）银浸染法173

（四）组织切片173

（五）脱水与透明174

（六）装片174

（七）灌注固定175

三、资料分析175

（一）细胞定位175

（二）细胞突176

四、资料表示法178

（一）Golgi法材料的绘图178

（二）照像179

五、Golgi法的几种改良法179

（一）双重及三重浸染法179

（二）Golgi-Kopsch法180

（三）Golgi-Cox法180

（四）适于胚胎性组织的Golgi法180

六、优点与缺点180

（一）优点180

（二）缺点181

七、附录181

（一）灌注的技术方法181

（二）快速Golgi法组织块的火棉胶包埋法181

（三）甲醛固定材料的快速Golgi法183

（四）快速Golgi法切片的稳定与复染183

（五）Golgi-Kopsch改良法183

（六）Golgi-Cox法184

（七）Ramón-Moliner法185

（八）胚胎组织Golgi法186

第十章 神经组织的电子显微镜技术制备187

一、引言187

二、固定与包埋的基本过程187

（一）麻醉187

（二）手术步骤188

（三）解剖与后固定188

（四）脱水与包埋189

三、各种处理法189

（一）人工呼吸190

（二）O2-CO2通气190

（三）灌注的压力190

（四）灌注液的温度190

（五）血管冲洗液191

（六）初级固定剂的组成191

（七）双重灌注191

（八）缓冲液冲洗与后固定192

（九）醋酸双氧铀的稳定作用192

（十）磷酸盐沉淀192

（十一）用于髓磷脂的处理法193

四、对光镜镜检结果的评价193

五、超薄切片与染色194

六、附录195

（一）血管冲洗液195

（二）0.4mol/L磷酸盐缓冲储备液195

（三）第一灌注固定剂195

（四）第二灌注固定剂196

（五）磷酸盐缓冲淋洗液196

（六）加倍锇处理缓冲液197

（七）4%OsO4储备液197

（八）OsO4后固定剂197

（九）亚铁氰化锇后固定剂197

（十）醋酸缓冲洗液197

（十一）醋酸双氧铀组织块处理液197

（十二）环氧树脂包埋混合剂198

（十三）半薄切片的装片与染色198

（十四）超薄切片染色199

第十一章 电镜镜检——正常与溃变神经成分电镜镜检的鉴定和研究200

一、引言200

二、光镜与电镜镜检之间的联系关系200

三、电镜镜检的实用指标201

（一）切片的选择201

（二）局部解剖202

（三）低倍率放大的检查（1,000-4,000X）203

（四）中倍率放大的检查（5,000-12,000X）204

（五）高倍率放大的检查（15,000-25,000X）205

四、神经成分的鉴定205

（一）轴突205

（二）树突205

（三）轴突样树突205

五、溃变神经纤维的超微结构207

（一）溃变的形式207

（二）小结212

六、形态测定法213

（一）计量法213

（二）取样213

第十二章Golgi法标本电镜镜检的传导通路追踪法215

一、引言215

（一）目的和可能性215

（二）技术探讨216

二、技术方法的一般描述218

（一）固定218

（二）锇酸及铬盐处理219

（三）银浸染法221

（四）初级厚切片221

（五）减浸染法221

（六）初级切片的包埋与再装片223

（七）组织包埋于树脂的厚切片223

（八）超薄切片法223

三、优点和缺点224

（一）优点225

（二）缺点225

四、结论性短评和问题探讨225

五、附录226

（一）锇与铬处理226

（二）甘油浸组织块227

（三）浸染组织的厚切片法227

（四）金调色228

（五）不用金的光化学（UV）法229

（六）用金的光化学法230

（七）“间断”Golgi浸银法231

（八）初级切片的平铺包埋231

（九）切树脂厚切片232

（十）切片重装法233

（十一）超薄切片法的监控233

（十二）铬酸银浸染的保持措施234

第十三章 荧光组织化学法——神经递质组织化学235

一、引言235

二、荧光组织化学法的化学基础237

（一）介绍237

（二）Falck-Hillarp法（甲醛缩合法）237

（三）乙醛酸（GA）法238

三、设备240

四、用甲醛或GA缩合法240

（一）介绍240

（二）Falck-Hillarp法240

（三）乙醛酸（GA）法248

五、荧光组织化学法的选择253

六、荧光组织化学法的优缺点254

（一）优点254

（二）缺点254

（三）结束语254

七、附录257

（一）荧光显微镜镜检与荧光显微镜257

（二）冷冻干燥器258

（三）振动切片机258

（四）恒冷切片箱259

（五）铝-甲醛恒冷切片箱切片法显示生物单胺递质（Lorén et al.,1980）259

第十四章 免疫细胞化学法261

一、引言261

（一）免疫学基础261

（二）理论基础261

二、免疫细胞化学技术的类型261

（一）直接法262

（二）间接法263

（三）小结264

三、过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）技术265

（一）固定265

（二）切片265

（三）免疫标记265

（四）光镜镜检266

（五）电镜镜检266

四、PAP技术改良法267

（一）固定267

（二）切片267

（三）试剂268

五、PAP技术的特异性268

六、PAP技术在显示儿茶酚胺能神经元中的应用269

（一）光镜下的传导束270

（二）酪氨酸羟化酶的超微结构定位271

七、PAP技术在神经肽类定位中的应用272

（一）光镜镜检273

（二）在轴索终末中肽的超微结构定位274

（三）肽能轴索与儿茶酚胺能神经元之间的突触相互作用275

八、PAP技术的优、缺点276

（一）优点276

（二）缺点276

九、结论277

十、附录277

免疫金-银染色法（IGSS）277

第十五章 2-脱氧葡糖（2-DG）法279

一、引言279

二、基本原理280

三、一般应用285

四、〔14C〕-2DG方法学286

（一）脱氧葡糖的注射与测定葡糖代谢率的方法286

（二）固定与切片287

（三）放射自显影照片的制备289

五、〔3H〕-2DG方法学291

六、数据资料分析291

（一）定性分析291

（二）定量分析292

七、优点与缺点293

（一）优点293

（二）缺点294

八、附录294

（一）固定剂294

（二）2-DG切片硫堇染色294

（三）〔14C〕-2-DG切片染色法295

参考文献296

索引335