根据GenBank已发表的pEGFP－C1序列，设计并合成两对引物，PCR扩增出两端各含一同向loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于载体pSKLR获得转移载体pSKLR-GFP-loxP；用磷酸钙转染法与PRVSH株共转染293T细胞，在5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）的筛选压力下，利用蚀斑法TK-143细胞筛选出含绿色荧光的TK基因缺失的重组毒株，命名为rPRV1；以此重组毒株为亲本毒，共转染表达Cre酶的质粒POG231，在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点，以蚀斑法得到纯化的含单个loxP位点的重组病毒株，命名为rPRV2。测定了重组病毒rPRV1和rPRV2在细胞上的生长特性、对老鼠的半数致死量。实验结果显示，缺失了TK基因后，其在细胞上的生长状况和病毒的滴度未见明显影响，且34bp的loxP位点在TK基因的插入对病毒的复制不产生明显影响。突变株对小鼠的半数致死量比亲本毒高至少220倍，表明突变株的毒力比亲本毒大大下降。

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