《利用RNA干扰机制抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖》高清PDF
作者:高晓飞著
出版:南京农业大学出版社
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本文利用RNA干扰机制,通过干扰猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)VR2332resp株N基因的表达,抑制病毒在MARC-145细胞上的复制。将pEGFP-N1荧光载体转染进入MARC-145细胞系中,摸索真核表达载体在MARC-145细胞中的高效表达的条件,为RNA干扰载体在MARC-145细胞中成功执行生物学功能做铺垫。设定不同的PRRSV病毒接毒量和不同的接毒时间,将干扰载体pBSU6-60和pBSU6-260以及对照载体pBSU6-Neg转染进入宿主细胞MARC-145中,成功观测到pBSU6-60和pBSU6-260在MARC-145细胞中对PRRSV病毒增殖的抑制现象。通过选取不同时间段的病毒上清做病毒TCID50检测,以及对CPE出现时间进行观察和免疫荧光技术,得到对PRRSVVR2332resp株增殖的抑制作用的动态数据。选取pBSU6-60组,在接毒后72小时,对PRRS病毒中N基因的表达情况进行Western-blot鉴定。结果显示,pBSU6-60干扰PRRSVVR2332Resp株N基因表达的效率可以达到70.15%。最终,(I)证实在真核细胞水平上,可以利用RNA干扰机制抑制PRRSVVR2332resp株在MARC-145细胞的增殖;(II)提出在所选PRRSVVR2332resp株N基因的两处靶位点序列中,存在对病毒复制起关键性作用的位点;(III)我们的结果表明,依靠载体表达的RNAi技术也许会对治疗PRRSV以及为其日后新型疫苗的开发提供一个新思路。
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