《表1 初始酯化酶与构建酯化酶的酶活对比》

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《白酒杂醇油酯化酶的分子构建》

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初始酯化酶经过多次易错PCR，以及PCR产物酶切，连接质粒，转化筛选，获得1株杂醇油酯化能力显著突变菌株L1-70，其酯化酶催化活性测定结果见表1。由表1可知，菌株L1-70对正丙醇、异丁醇及异戊醇均有酯化作用，酯化酶酶活分别是初始酯化酶酶活的2.28倍、2.42倍及2.29倍。已有报道的酯化酶的研究主要为以乙醇为底物的酶[17-19]，构建的杂醇油酯化酶能高效酯化非乙醇的高级醇。酯化酶对杂醇油酯化能力的提高主要原因是氨基酸序列的改变导致的酯化酶三维结构的改变[24]，三维结构的改变可能导致了结合部位或催化部位的改变，从而更有利于杂醇油、乙酸和酶形成复合物，进而形成乙酸正丙酯、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯。