《表2 用于qRT-PCR的引物》

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《海岛棉GbAGL15和GbAIL5的克隆及其在低温诱导XH16体胚发生同步化过程中的表达》

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UBQ7:多聚泛素酶基因7

以XH16的GbAIL5和GbAGL15基因的编码区序列为模板，用Primer Premier 5软件设计引物，以棉花的多聚泛素酶基因7（ubiquitin-fusion protein7，UBQ7）基因为内参基因（表2）。以上述cDNA作为模板进行检测，qRT-PCR反应在7500 Fast RealTime PCR System（ABI公司，美国）上进行，反应体系为20μL。包括模板2μL，上下游引物（10μmol/L）各0.4μL，TransStart?Green qPCR Super Mix 10μL，ddH2O 7.2μL。反应程序为94℃预变性30 s；94℃变性5 s，60℃退火30 s，共45个循环。结果采用比较Ct值法（即2-ΔΔCt法）进行相对定量分析，制作柱形图表示GbAGL15和GbAIL5基因在胚性愈伤组织低温处理后转回28℃培养不同天数的表达情况。实验进行3次生物学重复。