《表1 实时定量PCR上、下游引物Tab.1 The primers used in real-time qPCR》

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《雌激素微环境下非经典Wnt/Ca~(2+)信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究》

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取第3代hPDLSCs胰酶消化后，以2×104/cm2密度接种于6孔板中，随机分为4组，空白组、对照组、雌激素组、抑制剂组，每隔3d换液，成骨诱导7d。Trizol法提取总RNA，检测RNA的浓度和纯度，根据TOYOBO逆转录试剂盒说明书逆转成cDNA，将得到的cDNA模板按照SYBR Green PCR Kit操作说明书加入检测体系，进行Real-time PCR反应，检测各组中经典Wnt信号通路基因β-catenin，非经典Wnt/Ca2+信号通路基因CaMKⅡ、NLK，成骨相关基因RUNX2、OCN的mRNA表达，以GAPDH为内参。用2△△Ct方法进行基因表达的计算。相关引物序列见表1。