《表1 引物序列:MiR-204-3p靶向EphB2调控非小细胞肺癌的作用机制》
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《MiR-204-3p靶向EphB2调控非小细胞肺癌的作用机制》
PCR细胞转染24 h后,收集细胞,冷PBS清洗细胞1次,由Trizol提取各组组织中总RNA。根据Taq Man Micro RNA Assays Reverse Transcription primer(4427975,Applied Biosystems,USA)的说明进行转录以产生c DNA,取2μL c DNA稀释至50 ng/μL,PCR扩增体系是20μL。逆转录反应条件:37℃反应30 min,85℃反应5 s。mi R-204-3p、U6、Eph B2、GAPDH的引物由北京擎科生物科技有限公司进行合成(表1)。使用定量PCR仪进行实时定量PCR。反应条件是在预变性95℃反应10 min,变性95℃反应10 s,退火60℃反应20 s,35个循环。PCR体系为20μL:q PCR正向引物(10μmol/L)0.8μL,q PCR反向引物(10μmol/L)0.8μL,ROX参考染料Ⅱ0.4μL,SYBRPremix Ex TaqTMⅡ10μL,c DNA模板2.0μL,灭菌蒸馏水6.0μL。其中mi R-204-3p的相对表达以U6作为内参,Eph B2 m RNA相对表达以GAPDH的表达作为内参。2-ΔΔCt表示目的基因相对表达水平,公式如下:ΔΔCT=ΔCt实验组-ΔCtGAPDH,其中ΔCt=Ct目的基因-Ct内参。其中Ct表示q PCR的扩增循环数。
图表编号 | XD00229499900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.09.01 |
作者 | 谢传华、陈海龙、黄萍、郭守俊、邱伊连、王硕、潘宜云、胡志苹 |
绘制单位 | 赣州市肿瘤医院内一科、赣州市肿瘤医院内一科、赣州市肿瘤医院内一科、赣州市肿瘤医院内一科、赣州市肿瘤医院内一科、赣州市肿瘤医院内一科、赣州市肿瘤医院内一科、赣南医学院生理教研室 |
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