《表1 基于循环置换蛋白的探针性质和特点》

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《细胞工厂氧化还原状态的荧光探针检测与调控》

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HyPer探针是将cpYFP插入到大肠杆菌转录因子OxyR的调节结构域中形成的[31]，该探针表面有2个Cys可以被氧化形成二硫键，构象的改变使cpYFP在420 nm的激发光下荧光强度降低、500 nm激发时荧光强度升高，荧光强度的比值随H2O2浓度的增加而增加。为了获得更高的灵敏度和动态范围，Bilan等[32]通过突变HyPer的OxyR-RD得到了HyPer-2和HyPer-3。HyPer-2是HyPer的Ala406Val突变体，动态范围扩展，但反应速率较低，有较大的缺陷；HyPer-3是HyPer的His34Tyr突变体，突变后动态检测范围与HyPer-2相近，但反应速率提升。在这3种探针中，HyPer-3的动态检测范围广，反应速率适中，更可能获得广泛的应用[32]。为了扩展Hyper荧光探针的光谱范围，用循环置换的红色荧光蛋白cpRFP替换cpYFP产生了Hyper Red荧光探针，该探针的反应速度更快、灵敏度更高，但作为一个强度型荧光探针，Hyper Red易受到环境干扰，较难实现H2O2的稳定测量[33]。HyPer系列探针的光谱特征和特点见表1。