《表1 候选内参基因引物序列及其相关信息》
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《地榆醇提物对对虾致病菌VP_(AHPND)生长影响及最适内参基因的筛选》
以金属浴加热法提取正常培养条件下VPAHPND的DNA为模板进行普通PCR扩增,6种内参基因引物信息见表1。普通PCR程序为:95℃10 min;95℃5 s,55℃34 s,72℃45 s,40个循环。用1%琼脂糖凝胶电泳检法检测条带完整性,并通过TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0(大连宝生物公司)对目的条带进行切胶回收,使用pMD18-T Vector Cloning Kit(大连宝生物公司)对目的基因进行克隆。将克隆好的菌液送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序,验证目的片段是否成功导入质粒。用Ta Ka Ra MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0(大连宝生物公司)提取克隆成功菌液的质粒,并以此标准品为模板,进行qRT-PCR分析,检测引物效率。qRT-PCR程序为:95℃10 min;95℃5 s,55℃34 s,72℃45 s,40个循环;熔解曲线分析使用Eppendorf的默认程序:95℃15 s,60℃15 s,95℃15 s。
图表编号 | XD00133210800 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.04.01 |
作者 | 杨泽禹、廖梅杰、王印庚、张正、韦信贤、李彬、荣小军 |
绘制单位 | 上海海洋大学水产与生命学院、中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室、中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室、青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室、中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室、青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室、中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室、青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出 |
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