《表2 qPCR检测两虫检出限的确定(n=3)》
qPCR是通过标准曲线计算待测样品序列浓度,首先要确认标线的可靠性。其中R2须达到0.95以上,斜率须在-3.1~-3.6范围内,扩增效率应在90%~110%之间[15]。本研究建立的对贾第鞭毛虫和隐孢子虫的特定基因的qPCR体系,所有的标准曲线R2≥0.95,扩增效率为90%~110%,其中,贾第鞭毛虫的标准曲线为y=-3.290 8x+43.133,隐孢子虫的标准曲线为y=-3.121 2x+39.082,可以用于贾第鞭毛虫和隐孢子虫目的基因的含量分析。同时,利用qPCR仪对一定浓度梯度(100、101、102、103、104、105、106copies/μl)的贾第鞭毛虫和隐孢子虫的目的基因进行扩增,并计算Ct值的变异系数(CV),见表2。结果表明,当目的基因的拷贝数浓度为10copies/μl时,CV>10%,结果不稳定。因而,qPCR可以准确测定拷贝数浓度为101~106 copies/μl样品。
图表编号 | XD0064918900 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.05.20 |
作者 | 李罗英、李红岩、于志勇、李洁、张艳芬 |
绘制单位 | 中国科学院生态环境研究中心中国科学院饮用水科学与技术重点实验室、中国科学院生态环境研究中心中国科学院饮用水科学与技术重点实验室、中国科学院生态环境研究中心中国科学院饮用水科学与技术重点实验室、中国科学院生态环境研究中心中国科学院饮用水科学与技术重点实验室、中国科学院生态环境研究中心中国科学院饮用水科学与技术重点实验室 |
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