《表2 qPCR检测两虫检出限的确定(n=3)》

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《饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的数字PCR测定法》


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qPCR是通过标准曲线计算待测样品序列浓度,首先要确认标线的可靠性。其中R2须达到0.95以上,斜率须在-3.1~-3.6范围内,扩增效率应在90%~110%之间[15]。本研究建立的对贾第鞭毛虫和隐孢子虫的特定基因的qPCR体系,所有的标准曲线R2≥0.95,扩增效率为90%~110%,其中,贾第鞭毛虫的标准曲线为y=-3.290 8x+43.133,隐孢子虫的标准曲线为y=-3.121 2x+39.082,可以用于贾第鞭毛虫和隐孢子虫目的基因的含量分析。同时,利用qPCR仪对一定浓度梯度(100、101、102、103、104、105、106copies/μl)的贾第鞭毛虫和隐孢子虫的目的基因进行扩增,并计算Ct值的变异系数(CV),见表2。结果表明,当目的基因的拷贝数浓度为10copies/μl时,CV>10%,结果不稳定。因而,qPCR可以准确测定拷贝数浓度为101~106 copies/μl样品。