《表1 RNA干扰靶序列：细胞型朊蛋白对人胃癌SGC7901和结肠癌HT29细胞株细胞凋亡影响机制研究》

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《细胞型朊蛋白对人胃癌SGC7901和结肠癌HT29细胞株细胞凋亡影响机制研究》

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根据PrPC(NM001271561.2）的基因信息，设计3条RNA干扰靶序列（表1），退火成双链DNA，退火体系：10×Oligo Annealing Buffer 2.0μL，序列F 5.0μL，序列R 5.0μL，ddH2O 8μL，退火条件：95℃5min，72℃5min，自然降温至25℃。随后按10×内切酶Buffer5.0μL，骨架载体1μg，内切酶1 10U，内切酶210U，ddH2O50μL配比在37℃2h的条件下进行酶切后胶回收（按照Axygen胶回收试剂盒说明书操作）。通过T4连接酶将shRNA和骨架载体进行链接，连接产物转化感受态细菌，挑选阳性克隆，进行DNA测序。