《表1 本研究所有的菌株及质粒》

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《6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶在产油细菌浑浊红球菌PD630脂质积累中的作用》

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注:KmR，具有卡那霉素抗性

通过NCBI网站查找出，R.opacus PD630中有5种同源基因gnd编码6PGDH。由于基因gnd是同源过表达，提取R.opacus PD630的基因组为模板，利用相对应的引物进行PCR扩增从其基因组中分离得到目的基因片段，上下游引物分别含有Bam HI和Xba I酶切位点。扩增得到的PCR产物经过1 g/dL琼脂糖凝胶电泳后进行胶回收，同时质粒pJAM2分别加入Bam HI和Xba I进行双酶切，酶切后的DNA片段和PCR产物分别按一定比例混合，利用T4连接酶进行连接，得到重组质粒pJAM2/gnd1、pJAM2/gnd2、pJAM2/gnd3、pJAM2/gnd4和pJAM2/gnd5。重组质粒中目的基因片段位于乙酰胺酶（ace）启动子下游，将以上构建得到的重组质粒用化学法转化到E.coli Top10的感受态细胞中，在添加有50μg/mL Km的LB固体平板上于37℃培养12～16 h，随机选取每一种重组菌株的转化子进行PCR验证，验证正确的阳性转化子送至上海桑尼生物科技有限公司进行基因测序验证。之后将测序正确的重组质粒电击转化至R.opacus PD630，得到过表达gnd的重组菌株。本实验所有的菌株及质粒见表1，所有的引物见表2。