《表3 两种方法对临床样品检测结果的符合率》

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《猪源产肠毒素大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立及初步应用》

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以等量混合的携带5种菌毛的ETEC基因组DNA(2.5×107拷贝/μL～2.5×103拷贝/μL）为模板，采用本研究建立的多重PCR方法扩增。结果显示，当5种混合大肠杆菌基因组DNA浓度为2.5×104拷贝/μL时仍然可以有效扩增（图5）。因此，多重PCR各菌株DNA的最低检测量均为2.5×104拷贝/μL，表明该方法的敏感性较高。2.6临床样品的检测结果采用uid A基因的PCR方法检测101株分离的大肠杆菌，结果表明均为大肠杆菌。随机选取的11个PCR产物的测序结果显示，均与大肠杆菌uid A基因序列完全吻合，进一步说明了该鉴定结果的准确性。通过多重PCR方法对101株大肠杆菌进行两次鉴定，结果显示河北省仔猪腹泻普遍存在携带多菌毛类型的ETEC（表2）。其中，携带K88、K99、F18ab和F41 ETEC的检出率最高为37.6%(38/101）；其次，携带K88、K99和F18ab ETEC的检出率为19.8%(20/101）；携带K88、F18ab和F18ac ETEC的检出率为16.8%(17/101）；而携带5种菌毛K88、K99、F18ab、F18ac和F41 ETEC的检出率为9.9%(10/101）；携带其它类型菌毛ETEC的检出率均在10%以下。因此，河北省仔猪腹泻绝大多数为携带3种及3种以上菌毛的ETEC混合感染，未发现单一菌毛感染。对分离菌进行的5种菌毛的单一PCR结果与多重PCR检测结果一致，二者对5种菌毛检测结果的符合率为100%（表3）。表明多重PCR方法准确性较高，可以用于临床样品的检测。