《表2 操作结果展示:嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙MHCⅠ基因在不同组织的表达》

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《嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙MHCⅠ基因在不同组织的表达》


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依据Trizol试剂盒说明书,提取对照组和试验组5个时间点7种组织样品的总RNA,采用1%的水平式琼脂糖凝胶电泳检测其完整性并用分光光度计检测确定浓度。再按照反转录试剂盒操作步骤,合成cDNA第一链,用于后续实验及qRT-PCR。以上述肌肉的cDNA第一链为模板,按照Taq plus DNA聚合酶说明书进行PCR反应体系的配置,反应条件为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,53℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环;72℃终延伸10 min。获得的PCR产物进行胶回收纯化后,与pMD18-T载体进行连接,并转入到大肠杆菌DH5α中,经PCR检测,获得的疑似阳性菌株命名为pMD18-T-MHCⅠ-α1+α2,将该菌株送哈尔滨博仕生物工程有限公司进行序列测定。利用SWISS-MODEL(http://www.expasy.ch/swissmod/SWISS-MODEL.html)、DNAMAN6.0、MEGA7和SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_sopma.pl)等软件对MHCⅠ基因α1+α2肽结合区的核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析。选择的参考物种信息如表2所示。