《表1 乙腈-0.5%甲酸水洗脱梯度》

《表1 乙腈-0.5%甲酸水洗脱梯度》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《镇惊温胆汤药物指纹图谱研究及对PTSD大鼠行为学影响的实验观察》


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1.2.3. 1 镇惊温胆汤指纹图谱制备1)色谱条件的确定:采用Waters Cortecs UPLC C18柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm)。常规流速0.4 L/min,柱温为35℃。着重选择流动相及测试波长。2)流动相的选择:比较了甲醇-水、乙腈-水和乙腈-0.5%甲酸水3种梯度洗脱系统。结果表明乙腈-0.5%甲酸水的梯度洗脱分离效果最好,23 min内出峰完全。见图1。以乙腈(B)-0.5%甲酸水(A)为流动相,洗脱梯度(以B相浓度表示)。见表1。3)检测波长的选择:首先针对镇惊温胆汤浸膏在190~330 nm进行紫外波长测试,着重观察出峰情况,发现在257 nm、283 nm和327 nm时出峰较多,分析后发现在327 nm下出峰较多,各峰比例合适峰形良好,分离度佳,因此选择以327 nm作为检测波长进行后续检测。4)提取溶剂的选择:浸膏的有效成分包含了水溶性成分和脂溶性成分,为了让其均能被有效的提出,查询文献后采用75%甲醇对浸膏进行稀释,并且为了避免产生偏移,提取各单味药材时也同样选用75%甲醇作为提取溶剂。5)稀释倍数的选择:人工选择将浸膏稀释5倍、10倍、20倍和50倍后观察,稀释50倍时浓度最为适宜,各峰出峰良好,波形佳,所以在后续检测中将稀释倍数定为50倍。6)供试药物溶液的配备:在50 m L容量瓶中加入1 m L镇惊温胆汤浸膏后再用甲醇定容,为确保镇惊温胆汤的检测效果,本实验选择浓度为75%的甲醇溶液,经过超声波处理后放在室内静置,待容量瓶中析出沉淀,再用吸管将上层清液吸出,用0.22μm微孔滤膜过滤,去除初始过滤液,继续过滤液至液相进样瓶中即得。