《慢性乙型肝炎患者树突状细胞TLR9表达与IFN-α抗病毒SVR相关性研究》项目，学科分类：临床医学，内科学32024，属于医学类应用研究，历时3年完成了任务计划书的研究内容。

一、背景，研究内容：

慢性乙型肝炎的发病机制非常复杂，对抗病毒治疗的临床效果差别很大，除与HBV有关外，研究表明与患者的免疫应答密切相关。先天性免疫在宿主抵御病原体侵入并激活或调节特异性免疫应答的过程中可能起着桥梁或关键的作用，这种作用是如何发挥作用，通过什么信号转导通路是比较令人关注的问题，临床实践中，干扰素-α因为具有抗HBV和免疫调节作用而被用于慢性乙型肝炎的治疗，对抗病毒应答的差别与宿主外周血树突状细胞TLR9的表达及信号转导机制是否相关是该实验研究的重点。

该研究检测慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的增值水平和细胞因子的分泌变化，并且通过MLR反应检测树突状细胞对T淋巴细胞的刺激反应，选用TLR9为实验的靶点，通过用TLR9激动性CpG-ODN以及TLR9抑制性ODN分别作用于慢性乙型肝炎患者树突状细胞，荧光定量PCR检测上述细胞中TLR9、MyD88、NF-κB mRNA的表达，检测细胞培养上清中IFN-α的含量，判断慢性乙型肝炎患者的免疫状态。通过构建稳定转染HBV全基因组并能够分泌完整HBV病毒颗粒的HepG2细胞，并将之与健康自愿者树突状细胞N-DC进行共培养，将共培养的细胞分为两组，一组加入TLR9抑制性ODN，另一组为对照组。运用Western blot法检测TLR9、MyD88、NF-κB蛋白的表达，用ELISA法检测培养上清中IFN-α的含量，通过表达分子的表达变化判断与抗病毒应答的相关性。通过该实验研究得出如下结论：在HBV感染宿主细胞之后，位于树突状细胞表面的TLR9能够通过调控MyD88和NF-κB蛋白上调IFN-α生成的表达，有助于实现对HBV的清除。以树突状细胞为介导，将TLR9通路作为HBV感染免疫治疗的切入点能够为靶向治疗慢性乙型肝炎开辟新方向。

二、创新性和先进性：

1.该实验研究从临床实践中发现问题，通过基础研究探讨慢性乙型肝炎树突状细胞TLR9的表达与INF-α抗病毒SVR的相关性，实验显示:慢性乙型肝炎患者的树突状细胞增殖速度、共刺激分子（CD83、CD86、CD40、HLADR）的表达量及刺激T淋巴细胞增殖的能力明显低于健康自志愿者，慢性乙型肝炎患者体内存在着树突状细胞数量减少及功能缺失。

2. TLR9激动性CpG-ODN作用于慢性乙型肝炎患者树突状细胞时能够明显提高TLR9、MyD88以及NF-κB的表达，TLR9抑制性ODN作用于慢性乙型肝炎患者树突状细胞时能够明显降低TLR9、MyD88以及NF-κB的表达。

3.TLR9的表达与MyD88和NF-κB之间可能存在正相关，位于树突状细胞表面的TLR9能够通过调控MyD88和NF-κB蛋白调节IFN-α生成，上调TLR9的表达，能够促使IFN-α的生产，从而可能实现对HBV的清除。以树突状细胞为介导，将TLR9信号通路作为HBV感染免疫治疗的切入点可能为靶向治疗慢性乙型肝炎开辟新思路。

三、查新报告结论：国内外未见有类似研究，达到国内先进水平。

四、应用推广情况：

该课题研究实验方法科学，可重复性强，对于慢性乙型肝炎的诊断、治疗和相关基础研究有较好的参考和指导价值，已经在郑州市第六人民医院、南阳市中心医院等单位进行推广应用，对于节约医疗资源，优化科研方法，有很好的应用发展前景，可产生良好的经济效益和社会效益。

成果说明

1.南阳市中心医院（2016年1月-2019年2月）：我院根据新乡医学院第一附属医院感染疾病科课题组研究的慢性乙型肝炎患者树突状细胞TLR9表达与IFN-α抗病毒SVR相关性研究实验研究，参考课题实验方法应用于临床观察和基础研究取得了良好的效果： （1）本研究从临床实验中发现问题并应用基础研究探索发病机制，探索慢性乙型肝炎治疗的免疫分子基础，基础和临床很好的有机结合。（2）从天然适应性免疫家族Toll样受体（TLR）介导的对HBV免疫抑制作用，研究Toll样受体9（TLR9）激动剂，通过细胞因子传递信号

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