《基因转染人源抗菌肽LL-37抗肿瘤效应及其分子机制探讨》

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项目来源:吉林省科学技术厅发展计划项目(200705357)。项目类别:应用基础研究。应用领域:肿瘤基因治疗。技术原理:肿瘤分子生物学、分子免疫学。该研究采用国内外先进的分子生物学技术,克隆了hCAP-18/LL-37基因,进行了DNA序列分析、RT-PCR及Westernblot基因表达检测;采用基因克隆技术构建hCAP-18/LL-37真核表达载体;筛选建立hCAP-18/LL-37基因转染稳定细胞株;采用免疫学技术、细胞培养技术、流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和半定量RT-PCR技术等系统地研究基因转染hCAP-18/LL-37对肿瘤细胞周期、凋亡、转移、免疫抑制能力及相关分子mRNA的表达的影响。采用基因克隆技术构建hCAP-18/LL-37基因真核表达载体,在真核细胞中表达,并筛选构建稳定转染细胞株,为研究hCAP-18/LL-37基因在肿瘤细胞中的作用建立可操作的技术平台,尚属首次。研究发现hCAP-18/LL-37基因转染可调控肿瘤细胞周期蛋白基因和凋亡相关基因Bax及Bcl-2的表达,抑制肿瘤细胞生长及促进肿瘤细胞凋亡,为抗菌肽LL-37抑制肿瘤细胞增殖提供理论依据。尚未见相似文献报道。研究发现hCAP-18/LL-37基因转染可调控免疫抑制因子VEGF、IL-10和TGF-βmRNA表达;为靶向抗菌肽LL-37解除肿瘤免疫抑制奠定了实验基础。尚属首次研究。该研究以抗菌肽LL-37为靶点,通过基因转染在基因与分子水平、细胞与动物水平检测肿瘤细胞免疫生物学行为的变化,包括肿瘤细胞的增殖与细胞周期的改变、肿瘤细胞凋亡等。更为有价值的是研究过基因转染LL-37对肿瘤细胞周期蛋白、凋亡分子、免疫抑制因子基因与蛋白表达是否具有调控作用,揭示了LL-37调控肿瘤细胞凋亡的分子机制;同时奠定了基因转染LL-37基因治疗肿瘤的可行性。为选取抗菌肽LL-37作为肿瘤治疗的靶点提供实验依据。该研究的最终目标是通过研究基因转染LL-37对肿瘤细胞生长、转移和免疫抑制能力的影响及其分子机制,为将抗菌肽LL-37作为肿瘤基因治疗靶点奠定实验基础。为临床肿瘤基因治疗提供相关的理论基础和积累相应的实验资料,并为同行同类研究提供可贵技术资料。该研究内容为一名博士论文与三名硕士论文研究成果,并已在国家核心期刊发表论文4篇。

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