《重要动物疫病集成检测技术及试剂盒的研究和应用》

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课题组作为农业生产养殖消费大国,随着国际交往和动物及其产品进出口贸易的增加,动物疫病国际间传播的风险日益增大,对世界各国的人体健康、农牧业生产和生态环境安全已构成巨大威胁,世界各国都极为重视重要动物疫病跨境入侵的防控。该项目针对进出境重要检疫对象马脑炎病毒、牛疙瘩皮肤病毒等重要动物疫病的病原为研究对象,建立或完善了多种重要动物疫病病原的系列检测技术及标准物质,为加强动物疫病国门把关、提升国内疫病防控能力。创新点和获得的主要成果:(1)率先在国内开展牛疙瘩皮肤病的研究,建立牛疙瘩皮肤病毒的基因芯片、LAMP、多重PCR、荧光PCR等检测技术,研发了牛疙瘩皮肤病毒基因芯片、LAMP和多重PCR检测标准物质及试剂盒,为外来疫病防控提供技术支撑。(2)以水泡性口炎病毒为载体,采用反向遗传技术,创新性构建了3株表达马脑脊髓炎病毒E2蛋白的重组病毒,研发出相应的检测标准物质;建立了东部型马脑脊髓炎、西部型马脑脊髓炎、委内瑞拉马脑脊髓炎以及西尼罗河病毒等12种虫媒病的WsP-mRT-PCR联用Lab-on-Chip方法,可同时实现“一孔12检”。(3)率先建立动物衣原体的多重套式PCR、多重TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,可快速高通量的鉴别检测流产嗜衣原体、鹦鹉热衣原体、猪源衣原体、家畜嗜衣原体等,分别研制出多重套式PCR和荧光PCR试剂盒,实现了病原的特异性快速鉴别检测。(4)建立了口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪TTV等的LAMP检测方法,研发了相应的LAMP检测试剂盒,方法简便、快速、特异、灵敏,可实现肉眼直接判定结果,能满足重大疫病防控和口岸快速通关要求,为口岸和基层实验室的临床快速检测提供了技术支撑。

成果说明

项目成果在全国直属检验检疫部门、动物疫病防控部门、大型养殖企业得到了广泛的推广应用。

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