《表1 实时定量引物序列:SIRT1/FoxO1通路对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成的影响》

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《SIRT1/FoxO1通路对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成的影响》


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乳脂合成基因及内参基因实时定量引物见表1,根据GenBank已公布的山羊基因序列,利用Primer Premier 5.0和Oligo 6软件分别设计特异实时荧光定量引物,采用跨内含子的方法,每对定量引物的上、下游引物分布在不同的外显子上,扩增产物长度约200 bp,各引物序列由上海生工生物工程有限公司合成。以GAPDH和UXT基因作为内参进行实时荧光定量PCR反应。PCR反应体系20μL:2×SYBR Premix Ex Taq Mix 10.0μL,cDNA模板1.0μL,上、下游引物(10μmol/L)各0.8μL,加RNase free H2O补足体系。于ABI 7500荧光定量PCR仪上进行反应,反应条件:95℃30 s,95℃5 s,60℃30 s,40个循环;添加熔解曲线。采用2-△△Ct法对数据进行分析,其中△Ct=Ct目的基因-Ct内参;△△Ct=△Ct试验组-△Ct对照组。每个样品设置3个重复。