《表1 诱导阶段甲醇流加补给速率》

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《枯草芽孢杆菌壳聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达及其酶解特性》

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高密度发酵方法及培养基参照Pichia Fermentation Process Guideline（Invitrogen）。简言之，筛选获得的高酶活转化子接种150 mL YPD培养基，30℃、200 r/min培养至OD600 nm约为10，作为种子液。高密度发酵选用5 L发酵罐，工作体积为1.5 L。分批发酵及甘油流加发酵时，采用28%氨水调pH 5.0，温度30℃，起始搅拌转速600 r/min，通气量1.5 m3/（m3·min）。待分批培养中甘油耗尽开始流加50%甘油6～8 h，通过控制流加补料速度监控溶氧大于20%。待菌体湿质量达到200 g/L后停止流加甘油，开始流加100%甲醇，更改pH值和转速分别为6.0和800 r/min。通过控制甲醇流加速度监控溶氧大于20%，甲醇流加速率见表1。诱导开始每12 h取样测定菌体湿质量、胞外壳聚糖酶活力及胞外蛋白含量。