《表1 q PCR所用引物》

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《蓝莓花色苷提取物对人脂肪干细胞增殖、分化和脂质积累的影响》


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使用TRIzol法[26]进行总RNA的分离。使用反转录试剂盒,并采用20μL反应体系从1μg总RNA中得到cDNA。qPCR使用SsoFast?Eva Green超混合液,并在CFX96 Touch qPCR仪上进行检测。反应条件为:95℃保持2 min(预变性);98℃保持5 s(变性),59℃保持30 s(退火),98℃保持5 s(延伸),40个循环。在每个样本中,基因表达水平均与内参蛋白(β-actin)的表达相一致。样本中基因的相对表达水平均由仪器软件CFX Manager 3.0使用Pfaffl方法自动计算。表1引物用于扩增人脂联素[27]、PPARγ和内参蛋白(β-actin)[28]基因。