《表1 PmTRACP基因克隆及q RT-PCR所用引物》

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《马氏珠母贝TRACP基因的克隆及组织表达》

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根据马氏珠母贝转录组数据库中TRACP的unigene序列设计基因特异性引物，扩增其中间片段，连接到PMD19-T载体并转化到DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆，送上海生工生物工程有限公司测序，验证正确后，按照clontech的SMARTTM RACE cDNA amplification kit说明书以及参考本实验室王志新等的方法[10]进行巢式PCR扩增，得5′和3′末端序列，通过10 mg/mL琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，分离纯化的目的基因片段连接到PMD19-T载体后转化到DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆测序，将测序后的序列与已知的片段拼接获得c DNA全长，所用基因特异性引物见表1。