《表1 GBS技术限制性内切酶种类》

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《GBS技术在植物中的研究进展》

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提取所研究物种DNA后，应用限制性内切酶进行酶切。根据所研究植物的DNA序列特点，选择合适的限制性内切酶对DNA进行切割。Ape KⅠ酶在所研究物种中的应用频率是最高的，该酶是一种Ⅱ型限制性内切酶，在所研究物种DNA的转座子区几乎没有识别位点，且部分甲基化敏感，如果两条链上识别序列3'-端的碱基是5'-甲基胞嘧啶则不会被限制性内切酶切断，从而避免了DNA片段长度过短的问题[3]。Ape KⅠ酶广泛应用于玉米、大麦、小麦、大豆等作物。对目前应用GBS技术在植物中使用的限制性内切酶进行总结归类，由于四碱基酶在DNA样品中的切割相对频繁，得到的片段最小，有益于下一步的处理，因此已有的研究中四碱基酶的利用相对较多。GBS技术限制性内切酶种类如表1所示。