《表3 本研究所选信号肽的相关信息》

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《启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达》

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根据NCBI网站上公布的全基因组测序结果，利用信号肽在线预测软件SignalP 4.1（http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）对地衣芽孢杆菌WX-02和枯草芽孢杆菌168菌株进行信号肽结构预测，选取预测结果中的15个信号肽（其中12个来源于地衣芽孢杆菌WX-02，3个来源于枯草芽孢杆菌168，GenBank登录号见表3）进行表达载体构建，启动子选用芽孢杆菌异源表达时常用的P43，筛选适合普鲁兰酶外泌表达的信号肽。首先根据所选信号肽结构对应的基因序列进行引物设计（表2）。不同载体构建过程的区别只在于所用引物不同，下面将仅对信号肽apr的构建过程进行说明:使用引物P43-F和apr-1进行第一轮PCR扩增，所得产物（P43+部分apr）进行1%的琼脂糖凝胶电泳后切胶回收，之后以回收产物为模板、以P43-F、apr-2和apr-3为引物进行第二轮PCR扩增，所得产物（P43+apr）再次进行胶回收，回收产物和经过EcoRⅠ单酶切的p HY300PLK-pul-TamyL载体利用ClonExpress II One Step Cloning Kit进行同源重组，之后转化E.coli TOP10感受态细胞，通过菌液PCR进行阳性克隆鉴定，并对阳性克隆进行序列测定。测序正确的菌株进行质粒提取，之后通过电击转化[2]地衣芽孢杆菌BL10的方法，得到所需重组表达菌株。