《表1 RT和扩增miRNA的引物》

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《补肾活血方含药血清对退变型人原代软骨细胞microRNA表达谱的影响》

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取提取的总RNA 1μg，5×Reaction Buffer 4μL，RT特异引物（1μm）1μL，dNTP（2.5 mm each）2μL，RNA酶抑制剂（20 U/μL）1μL，MMLV反转录酶（200 U/μL）1μL，加ddH2O至总体积为20μL，放入PCR仪进行RT反应，16℃，30 min；42℃，40 min；85℃，5 min。反应完成后，把它放置于冰上待用或-20℃存放。在把RNA反转录合成第一链cDNA时，在RT反应体系中，U6和miR-140-5p分别加进表2所示各自对应的RT引物。使用Primer5.0生物软件设计本次实验中的特异性引物，分别设计了内参U6，扩增片段大小为89 bp；miR-140-5p，扩增大小为65 bp。所有引物均由上海英潍捷基贸易有限公司合成，相关引物信息如表1所示。