《表2 本研究中的寡核苷酸序列》

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《温敏类弹性蛋白多肽的基因设计及重组克隆表达》

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注:斜体加粗表示限制性内切酶的识别位点，Bse RⅠ（GAGGAG），AcuⅠ（CTTCAG）；下划线表示核糖体结合位点；粗体表示起始密码子Note:Recognition sites of endonuclease restrictions（italic bold），Bse RⅠ（GAGGAG）and AcuⅠ（CTTCAG）；Rribosomal binding site (underline

设计两条寡核苷酸序列--F-28/R-28，由北京奥科鼎盛生物公司合成（表2）。将F-28/R-28进行磷酸化以便进行连接反应。磷酸化体系包括F-28和R-28各5μL（10μmol/L）、T4 DNA连接酶缓冲液2.5μL、T4多聚核苷酸激酶1μL，ddH2O补至总体积25μL，37℃反应1 h后添加1μL Na Cl（1 mol/L）终止磷酸化反应，随后放入PCR仪中，程序设定95℃2 min后，缓慢降温至16℃，使F-28/R-28退火形成具有XbaⅠ/Bam HⅠ黏性末端的双链DNA片段。