《表1 本研究中的引物序列》

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《过表达漆酶基因Lelcc1的香菇菌株构建及表型分析》

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注:a引物序列中小写字母表示构建载体时的同源臂序列

以香菇W1的菌丝体为受体材料，开展农杆菌介导的香菇遗传转化（胡悦等2018）。将出发菌株W1和在不含潮霉素的培养基上继代培养3次后仍有潮霉素抗性的拟转化子分别接种于贴有玻璃纸的MYG固体培养基上，经25℃恒温培养10d后收集菌丝体，采用CTAB法提取菌丝体中的DNA，利用引物组合gpd-F/hpt-R或act-1312/lcc1-2310（表1）分别对转化子进行PCR鉴定。将PCR鉴定为阳性的转化子接种于含4μg/mL潮霉素的MYG抗性平板中，于25℃恒温培养并收集菌丝体，采用真菌基因组DNA快速抽提试剂盒（生工，上海）提取高质量总DNA，用HindⅢ对基因组DNA进行酶切，以hpt557-F和hpt557-R（表1）为引物扩增获得的HygR基因片段作为探针进行Southern杂交（天问，武汉），判断T-DNA区是否整合到香菇基因组中，并筛选出单拷贝插入的转化子。