《表1 基因和转录因子名称及实时荧光定量PCR引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《沙棘种子发育期茉莉酸水平变化及其信号基因表达分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

沙棘不同发育期种子总RNA的提取参照上海生工公司柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒方法。第一链cDNA合成参照宝生物公司PrimeScriptTMRT reagent Kit with g DNA Eraser（Perfect Real Time）试剂盒方法。转录因子TCP2和MYC2及JA合成相关基因序列来自研究组的沙棘不同发育期种子高通量转录组数据库，其特异性引物（表1）设计利用在线软件PrimerQues。hrhmi319的上下游引物分别为FP:TTG GACTGAAGGGAGCTCCT和RP:CTCAACTGGTG TCGTGGA。参照宝生物试剂盒SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNaseH Plus）方法，在冰上操作制备qRT-PCR反应体系。反应总体系20μL:10μL SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNaseHPlus），0.4μLROX Reference Dye（50×），0.8μL左引物（10μmol/L），0.8μL右引物（10μmol/L），2μL cDNA模板（50 ng/μL，总RNA），6μL DNase/RNase-free ddH2O。qRT-PCR扩增反应使用ABI7500 Real time PCR仪（美国Applied Biosystems公司）推荐程序进行，反应程序为95℃30 s，95℃5 s，60℃34 s，40个循环。反应结束后查看基因扩增和溶解曲线情况，并导出Ct值，采用2-△Ct的方法对各基因相对表达量进行分析（张得钧等，2015）。基因和转录因子的表达用沙棘Actin基因做内参，hrhmi319表达分析的内参为U6。实验设3次生物学重复。