《表1 花斑裸鲤Epo和Epor基因克隆及分析引物》

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《花斑裸鲤Epo和Epor基因克隆及其低氧诱导的mRNA表达》

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花斑裸鲤Epo全长编码序列（coding sequence，CDS）的克隆采用一对引物EPO_F和EPO_R（Xu et al.2016）（表1） 。Epor全长CDS的克隆采用2对引物（EPOR_F1和EPOR_R1，EPOR_F2和EPOR_R2）分段克隆（表1）。引物根据Gen Bank登录的安水金线鲃（Sinocyclocheilus anshuiensis）的Epor c DNA全长序列（XM_016451553）设计。Epo和Epor c DNA的克隆以红肌c DNA第一链为模板，利用Premix Ex Taq®；Version 2.0试剂盒进行PCR扩增。PCR扩增程序:94℃预变性3 min；98℃变性10 s，55~60℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35循环；最后一循环72℃续延伸5 min。PCR扩增产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后，用Ta Ka Ra Agarose Gel DNA Purification Kit Ver.2.0产物回收试剂盒进行回收纯化，然后克隆至p MD19-T载体中，转化感受态E.coli JM109，PCR检测阳性克隆后送生工（上海）生物有限公司进行测序，测序引物为RV-M和M13-47（表1）。