《表1 引物信息:陆地棉胁迫相关蛋白基因GhSAP8的克隆及其耐盐性分析》
本系列图表出处文件名:随高清版一同展现
《陆地棉胁迫相关蛋白基因GhSAP8的克隆及其耐盐性分析》
Gh:陆地棉;At:拟南芥;SAP:胁迫相关蛋白;Ubi:泛素;Actin2:肌动蛋白2;P5CS1:Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶;RD29B:脱水诱导蛋白29B;SOS1:盐超敏感蛋白1;NHX1:Na+/H+转运蛋白1;下划线与斜体分别表示酶切位点与保护碱基
取100 mg棉花组织,参照Easy Pure Plant RNA Kit(Trans Gen,北京)说明书提取棉花总RNA,以Nano Drop测定RNA浓度,取1μg总RNA参照Easy Script First-Strand c DNA Synthesis Super Mix(Trans Gen,北京)说明书合成c DNA。以c DNA为模板,利用特异性引物Gh SAP8-F/R (表1)进行GhSAP8基因片段的PCR扩增。引物由上海生工生物工程公司合成。PCR反应体系:c DNA (50 ng/μL)1μL、5×Trans Start Fast Pfu buffer 4μL、2.5 mmol/L d NTP 2μL、DNA Polymerase 0.3μL、上下游引物(10μmol/L)各0.5μL,用dd H2O补足20μL。PCR反应条件:95℃5 min;95℃30 s,58℃30 s,72℃30 s,35个循环;72℃10 min。扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳分离,纯化回收后与p EASY-Blunt载体连接并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH5α,挑选阳性克隆交送上海生工生物工程公司进行测序分析。植物总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、DNA Polymerase及p EASY-Blunt载体均购自北京全式金生物技术公司。使用在线分析软件Prot Param tool (https://web.expasy.org/protparam/)预测目标蛋白的氨基酸组成、分子量及等电点。将Gh SAP8基因的氨基酸序列提交NCBI数据库,进行Blast P比对后得到其他物种中的同源序列,利用DNAMan (Version 7)进行蛋白序列比对分析,利用MEGA6构建系统进化树(neighbor-joining法,boot-strap分析1000次)。
图表编号 | XD00224402500 严禁用于非法目的 |
---|---|
绘制时间 | 2020.07.25 |
作者 | 王亦学、董艳辉、张欢欢、郝曜山、孙毅、吴慎杰 |
绘制单位 | 山西省农业科学院生物技术研究中心、棉花种质资源利用与分子设计育种山西省重点实验室、山西省农业科学院生物技术研究中心、山西省农业科学院生物技术研究中心、山西省农业科学院生物技术研究中心、山西省农业科学院生物技术研究中心、山西省农业科学院生物技术研究中心、棉花种质资源利用与分子设计育种山西省重点实验室 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |