《表2 引物信息：DNA池快速筛查中国荷斯坦牛TLR_1～TLR_6基因SNPs及等位基因频率估算》

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《DNA池快速筛查中国荷斯坦牛TLR_1～TLR_6基因SNPs及等位基因频率估算》

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从NCBI数据库中获得牛TLR1、TLR2、TLR6基因DNA序列（Gen Bank登录号分别为:NM＿001046504，NM＿174197，NM＿001001159），使用Primer 6.0软件针对每个基因共设计15对特异性引物（表2），并交由苏州金唯智生物有限公司合成。PCR扩增体系为40μL:DNA池模板2.0μL，0.25μmol/L上下游引物各0.8μL，2×Taq PCR Master Mix 22.0μL，蒸馏水14.8μL。扩增条件为：94℃预变性5 min；35个循环×（95℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸30 s）；72℃再延伸10 min，4℃保存，2%琼脂糖凝胶对扩增结果进行检测。