《表2 q PCR引物特异性检测》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《叠氮溴化丙锭-荧光定量PCR法实时快速检测5种乳杆菌活菌数方法的建立与应用》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

注：+：阳性扩增结果；-：阴性扩增结果；a:10株菌中有8株表现出阳性扩增结果.

减少或消除引物的非特异性结合是提高q PCR法检测生物量准确度的关键[14]。通过NCBI、RDP数据库和Test Prime检索证明了引物理论上的特异性，进一步通过q PCR实验对引物的特异性进行检测，结果见表2。与乳杆菌亲缘关系较远的醋酸杆菌、芽孢杆菌和大肠杆菌与6对乳杆菌引物均表现出了阴性q PCR结果。以购买到的4株乳杆菌和从黄酒发酵醪液中筛选到的4株Lactobacillus sp.与10株Enterococcus spp.作为与目标微生物亲缘关系较近的菌种库，对引物特异性进行进一步验证，结果显示植物乳杆菌引物（LPrec AF/LPrec AR）、发酵乳杆菌引物（LFerm F/LFerm R）、短乳杆菌引物（s-Lbre-F/s-Lbre-R）、嗜酸乳杆菌引物（Acidfor/Acidrev）和干酪乳杆菌引物（Lcase F/Lcase R）具有较高的特异性，只与目标微生物特异性结合，熔解曲线单一。但实验发现基于16S r RNA基因设计的乳杆菌属引物（Lacto F/Lacto R）不仅能与10株乳杆菌结合，也能与8株肠球菌结合表现出扩增信号。肠球菌作为乳酸菌的一种，与乳杆菌具有较近的亲缘关系，在16S r RNA基因上具有较高的相似性[23]，这使得基于16S r RNA基因设计的乳杆菌属引物无法准确地区分两个属，揭示这对引物只适用于肠球菌属含量较少样本中乳杆菌的定量检测。