《表2 Lp NPFF基因原位杂交引物》

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《神经肽FF在小黄鱼(Larimichthys polyactis)性腺发育早期的表达与定位分析》

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在小黄鱼神经肽FF基因的ORF区内设计原位杂交探针的引物，反义探针（用A表示）需在下游引物前加上T7启动子序列，正义探针（用S表示）需在上游引物前加上T7启动子序列，引物序列参见表2。探针根据Riboprobe?Combination System-SP6/T7 RNA Polymerase试剂盒以及DIG RNA Labeling Mix说明书进行操作。在杂交前对组织切片进行脱蜡、复水、通透处理，并且在预杂交液中孵育1 h （42°C）；暗盒中50°C杂交过夜；滴加二抗（抗地高辛-AP抗体，稀释1︰2000），室温暗盒中静置3 h；BCIP/NBT染色封片后显微观察。